您好,歡迎進入研域(上海)化學試劑有限公司網站!
一鍵分享網站到:
  • 技術文章ARTICLE

    您當前的位置:首頁 > 技術文章 > 我司分享:關于細胞傳代的操作

    我司分享:關于細胞傳代的操作

    發布時間: 2020-04-08  點擊次數: 117次

    1.細胞吸除培育瓶內舊培育液。

     

    2.參加無菌pbs洗液(5-8mL)悄悄潤濕細胞,稀釋多余的培育基,之后吸走洗液,動作要輕,不可吹打到細胞。

     

    3.向瓶內參加含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少許,以能覆滿瓶底為限。 

     

    4.置溫箱中2~5分鐘,一旦鏡檢發現細胞質回縮,細胞間隙增大后,細胞變圓,比較松動后,當即終止消化。
    ?

    5.參加該細胞對應的培育基6mL(T25培育瓶)或12mL(T75培育瓶)終止消化。

     

    6.用吸管通過吸取的培育基悄悄反復吹打瓶壁細胞,使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時應盡量以少的次數將細胞從壁上吹下,不只要操控吹打的力度、次數,還要留意要將細胞盡可能吹成單個。這樣既能削減死細胞,又能便于細胞再次均勻貼壁成長。

     

    7.依據傳代份額,將細胞懸液分瓶,再補充培育基后,靜置于溫箱培育,直止貼壁。

     

    貼壁細胞在培育瓶長成致密單層后,持續成長的空間缺乏,培育基中的養分成份也耗費較多,同時代謝廢物也有較多堆積,需要分瓶培育,對細胞進行傳代擴增。關于貼壁不太緊的細胞如293,能夠直接吹散后分瓶。而關于貼壁較緊的細胞如CHO,則需要以胰酶消化后再吹散分瓶。

     

    關于懸浮細胞換液時只需要補液就行。

     

    懸浮細胞的傳代則不需要用胰酶消化,直接通過計數算好傳代的份額,直接分瓶,補液。有些懸浮細胞趨于成團成長,此刻細胞成長狀態杰出,當補液時,防止吹打。典型實例:jurkat便是成團成長。當jurkat細胞密度比較大時,可將培育瓶豎直放置2分鐘左右,待大部分細胞沉下,吸走上層清液,補充等量的新鮮培育基。

產品中心 Products
在線客服 聯系方式

服務熱線

021-54479081
021-54461587

平特一码赔率是多少
掃一掃訪問手機站掃一掃訪問手機站